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丙酮酸含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

丙酮酸(PA)含量檢測(cè)試劑盒 

Pyruvic Acid (PA) Content Assay Kit

丙酮酸含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)圖1

丙酮酸含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)產(chǎn)品描述:

丙酮酸(Pyruvic Acid)是生物代謝及物質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要中間體,可通過(guò)乙醛 CoA 和三羧酸循環(huán)實(shí) 現(xiàn)體內(nèi)糖、脂肪和氨基酸間的相互轉(zhuǎn)化,在營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝過(guò)程中起著重要的樞紐作用。丙酮酸分子中 同時(shí)具有羰基和羧基兩個(gè)官能團(tuán),除具有羧酸和酮的性質(zhì)外,還具有 α-酮酸的性質(zhì),作為一種基本化 工原料在化學(xué)、制藥、食品、農(nóng)業(yè)及環(huán)保等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。 丙酮酸能夠與 2,4-二硝基苯肼反應(yīng)生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在堿性溶液中進(jìn)一步被氧化為棕 紅色物質(zhì),產(chǎn)物在 520 nm 處具有特征吸收峰,通過(guò)吸光值的變化即可定量檢測(cè)丙酮酸的含量。


丙酮酸含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)產(chǎn)品內(nèi)容圖示:

丙酮酸含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)圖2


丙酮酸含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)產(chǎn)品使用說(shuō)明:

測(cè)定過(guò)程中所需要的儀器和試劑:可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽/勻漿 器、可調(diào)式移液器、臺(tái)式離心機(jī)和蒸餾水。

①組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:(5-10)的比例(建議稱取 0.1 g 組織,加 入 1 mL 提取液)處理樣品,冰浴勻漿,室溫靜置 30 min,8000 g 常溫離心 10 min,取上清待測(cè)。 

②細(xì)菌或細(xì)胞:離心收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL) 為(500-1000):1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1 mL 提取液)處理樣品,冰浴超聲破碎(功 率 20%,超聲 3 s,間隔 10 s,重復(fù) 30 次),室溫靜置 30 min,8000 g 常溫離心 10 min,取上清待測(cè)。 

③血清(漿)、培養(yǎng)液等液體樣本:按照樣本體積(mL):提取液體積(mL)為 1:(5-10)的比 例(建議 0.1 mL 液體樣本加入 1 mL 提取液)處理樣本,充分混勻后室溫靜置 30 min,8000 g 常溫離 心 10 min,取上清待測(cè)。


丙酮酸含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定步驟說(shuō)明:

①分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 520 nm,蒸餾水調(diào)零。

②在 96 孔板或微量玻璃比色皿中依次加入下列試劑。

丙酮酸含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)圖3


吸光值測(cè)定:測(cè)定 520 nm 處吸光值,記為 A 測(cè)定、A 標(biāo)準(zhǔn)和 A 空白,計(jì)算?A 測(cè)定=A 測(cè)定-A 空白,?A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白。注:空白組只需測(cè)定 1-2 次。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:以 100、50、25、12.5、6.25、3.125 μg/mL 為橫坐標(biāo)(x),以其對(duì)應(yīng)的?A 標(biāo)準(zhǔn) 為縱坐標(biāo)(y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b,將?A 測(cè)定帶入公式中得到 x(μg/mL)


丙酮酸含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)丙酮酸含量計(jì)算圖示:

丙酮酸含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)圖3

注釋:V 樣:反應(yīng)體系中加入待測(cè)樣本的體積,75 μL=0.075 mL;V 提:待測(cè)樣本總體積,1 mL; V 液:液體樣本的體積,0.1 mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量: 以萬(wàn)計(jì)。


丙酮酸含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)注意事項(xiàng) 

①血液樣本抗凝劑建議使用肝素鈉-氟化鈉,抗凝血樣品置于冰浴中送檢,盡快分離血漿。

②若 ΔA 測(cè)定超出標(biāo)準(zhǔn)線性吸光范圍,建議適當(dāng)增加樣本(低于標(biāo)準(zhǔn)下限)或適當(dāng)稀釋(高于標(biāo) 準(zhǔn)上限)后再進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算時(shí)相應(yīng)修改。


丙酮酸(PA)含量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品在線訂購(gòu):http://www.m.linkeyuan.cn/products-307.html

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