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谷氨酸(Glu)含量的檢測方法

谷氨酸(Glu)含量的檢測方法多種多樣,主要包括以下幾種:


1. 紫外分光光度法

紫外分光光度法是通過谷氨酸脫氫酶(GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+,隨后NADH在340nm處產(chǎn)生吸光度變化來計算谷氨酸含量。具體步驟包括:

試劑準(zhǔn)備:將試劑一解凍至室溫或水浴預(yù)熱5-15分鐘。

樣品處理:根據(jù)樣本類型(如組織、細胞、血清等),按比例加入試劑一進行冰浴勻漿,離心后取上清液。

測定:使用紫外分光光度計在340nm波長下測定吸光度變化,通過公式計算谷氨酸含量。


2. 比色法(WST法)

比色法基于谷氨酸脫氫酶催化谷氨酸與NADH反應(yīng)生成NADH,后者在450nm處產(chǎn)生最大吸收峰。具體步驟如下:

試劑準(zhǔn)備:將試劑一和試劑二按比例混合后加入樣本中。

測定:使用分光光度計在450nm波長下測定吸光度變化,通過公式計算谷氨酸含量。


3. 微量法

微量法適用于小樣本量的檢測,通常結(jié)合酶標(biāo)儀或分光光度計進行操作:

試劑準(zhǔn)備:將試劑一和試劑二按比例混合后加入樣本中。

測定:在特定波長(如570nm或340nm)下測定吸光度變化,通過公式計算谷氨酸含量。


4. 高效液相色譜法(HPLC)

HPLC法通過柱前衍生化技術(shù)將谷氨酸轉(zhuǎn)化為可檢測的衍生物,適用于復(fù)雜樣品的定量分析:


試劑準(zhǔn)備:使用鄰苯二甲醛(OPA)作為衍生試劑。

測定:通過色譜柱分離谷氨酸衍生物,并在特定波長下檢測其濃度。


5. 磁共振成像技術(shù)(MRS)

MRS技術(shù)通過檢測谷氨酸與自由水之間的化學(xué)交換信號來定量分析谷氨酸含量:

原理:利用磁共振化學(xué)交換飽和轉(zhuǎn)移(CEST)技術(shù),通過非對稱分析方程式計算谷氨酸濃度。


6. 其他方法

電化學(xué)傳感器:基于納米線電極或碳基材料的電流變化來檢測谷氨酸。

熒光光譜法:通過熒光探針檢測谷氨酸的熒光信號變化。


注意事項

樣本處理:不同樣本類型(如組織、細胞、血清等)需根據(jù)說明書進行勻漿、離心等預(yù)處理。

儀器校準(zhǔn):使用標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)儀器,確保測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

試劑保存:大部分試劑需冷藏保存(如-20℃或4℃),并注意有效期。

谷氨酸含量的檢測方法多樣,選擇適合的檢測方法需根據(jù)樣本類型、實驗條件及靈敏度要求等因素綜合考慮。


 

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