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常見問題 行業動態

ELISA試劑盒常見問題與解析

1、一個ELISA試劑盒檢測幾個樣品?

小編自己在各大論壇看到最多的三個答案:

1)48T 可做42個樣本加6個標準曲線;96T 可做90個樣本加6個標準曲線

2)以96T試劑盒來算,定量的試劑盒一般可以做90個左右的樣品,定性的試劑盒可以做94個左右的樣品

3)96T的ELISA試劑盒,去除標準品復孔檢測,最多還能檢測80個標本;48T的最多30個樣本。

2、elisa試劑盒96T的能做檢測多少血清樣品?板能重復利用嗎?

96T,一般做復孔的話,做標準曲線需要16個孔,剩下80個孔就可以做40個樣本。這個板不能重復利用。而且配套的試劑也只是夠一塊板子用的。

3、想請教一下,我想用elisa法測血清里的一種抗原,查了資料,發現沒有現成的試劑盒用,現在就有2種備選方案,一種是買抗體對自己包被(查了R&D等大公司都沒有可用于elisa的單抗)。哪種比較好呢?自己包被的會不會比國產的試劑盒可靠呢?

如果你覺得技術不錯有隊其他公司不放心,可以自己購買抗體對自己包被,這個就是麻煩點,自己包被用著放心,舒心;

另外國內還是有一些資質不錯的公司,如北京達科為,上海巧伊,依科賽,深圳欣博盛等等

4、western 和ELISA 處理樣本有何差別?

Western Blot 樣品制備要加蛋白裂解液(含有蛋白酶抑制劑),然后冰上研磨,收集于EP管,冰上裂解30min,4度12000rpm離心15min,取上清分裝,即得到蛋白樣品。建議直接電泳,多余的-80保存。建議分裝的蛋白每支略多于一次上樣量,一次性用完一支,避免反復凍融。

ELISA樣品,直接腦組織冰上勻漿,收集于EP管,同上一樣離心,大約220-250ul每支分裝(因為ELISA上樣量基本都是每孔100ul,做復孔,每個樣品2孔,就需要200ul,為了避免不夠2孔,分裝時要大于200ul每支),直接實驗。多余的-80保存,一樣避免反復凍融。

不過ELISA最好少量樣品進行預實驗,或者查閱文獻,看看大概組織里有多高濃度,選擇合適的試劑盒,測量范圍要與組織濃度相符。避免濃度過高測量不準,或者濃度過低,小于試劑盒最低可測濃度。

5、Elisa試劑盒該買哪家公司的呢?

提出這個問題的朋友其實該打,目前國際上各個品牌的試劑盒生廠商,都會有其偏重點,像R&D在細胞因子方面的試劑盒就非常牛逼,而其他牌子也一樣的。

Bender:粘附分子方面的試劑盒;

Cayman:花生四烯酸類產品的試劑盒;

Merck(Linco):內分泌研究方面的試劑盒;

Tips:

1、買Elisa試劑盒時,盡量先查文獻,通過文獻找品牌,再找供應商,找供應商就找正規代理商,千萬不要去干“賠夫人又折兵”的蠢事。

2、ELISA中,復孔就是同一個樣品加到至少兩個孔中(一般3個或4個),最后取其平均值作為樣品的讀數,這樣測得的結果才有說服力!

做復孔是為了較好的較少組內差異,如果血清不足不做復孔也可以。


 

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