ELISA試劑盒以靈敏度較高、對(duì)于實(shí)驗(yàn)新人而言，如何正確的選擇Elisa試劑盒的使用呢?
Elinsa試劑盒特異性較好的特點(diǎn)在上得到了廣泛的應(yīng)用，然而實(shí)驗(yàn)新手們面對(duì)各種各樣、動(dòng)則上上千種的ELISA試劑盒，內(nèi)心應(yīng)該是崩潰的。
各種廠(chǎng)家、品牌，各種種屬，各種因子，琳瑯滿(mǎn)目，質(zhì)量良莠不齊，如何浪里淘金，選擇既符合研究需求，又品質(zhì)上乘的 ELISA 試劑盒呢? 首先，你要明確研究種屬： 第一步，廠(chǎng)家都會(huì)在產(chǎn)品名稱(chēng)上標(biāo)明種屬，且為首個(gè)單詞，檢索種屬的常用語(yǔ)言為英文。 如果您需對(duì)不同物種的同一因子進(jìn)行定量，建議優(yōu)先尋找適用于多個(gè)種屬的 ELISA 試劑盒，產(chǎn)品介紹中會(huì)注明「Multi-species」。
第二步，要明確樣本類(lèi)型： 不同廠(chǎng)家驗(yàn)證樣本類(lèi)型不同，即使同一廠(chǎng)家不同試劑盒，其驗(yàn)證樣本類(lèi)型也不盡相同。特別是復(fù)雜的血漿樣本，根據(jù)樣本處理方式的差異，分為 EDTA 血漿、肝素抗凝血漿和檸檬酸鹽血漿，因此購(gòu)買(mǎi)前需仔細(xì)核對(duì)。
第三步：要會(huì)預(yù)測(cè)自己的目標(biāo)因子的濃度 一般來(lái)說(shuō)，待測(cè)因子可以根據(jù)經(jīng)驗(yàn)或資料獲得參考的檢測(cè)范圍，且正常人與疾病狀態(tài)存在差異。如熱門(mén)炎癥因子 IL-6，正常人血清中濃度為 3.13 pg/mL，病人會(huì)顯著增高，CAR-T 回輸病人血清中的 IL-6 濃度甚至為正常人的 200 倍以上。 因而，必要時(shí)進(jìn)行樣本的稀釋及選擇合適檢測(cè)范圍的試劑盒極其重要。 若濃度太低，可選擇高敏試劑盒;若不確定待測(cè)濃度或樣本間濃度差異較大，建議使用檢測(cè)動(dòng)態(tài)范圍更寬的化學(xué)發(fā)光法ELISA試劑盒。 如同樣為 IL-6 ELISA 試劑盒，各類(lèi)型檢測(cè)范圍差異較大，需要根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的試劑盒。
第四步：檢查試劑盒進(jìn)行過(guò)哪些質(zhì)控 質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)在說(shuō)明書(shū)中即可找到，在購(gòu)買(mǎi)前檢查試劑盒是否進(jìn)行過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)控實(shí)驗(yàn)，包括批次內(nèi)(Intra-Assay)及批次間(Inter-Assay)、摻入回收實(shí)驗(yàn)、線(xiàn)性稀釋實(shí)驗(yàn)及交叉反應(yīng)測(cè)試等，每個(gè)數(shù)據(jù)最好都看一下，確保超強(qiáng)的結(jié)果重現(xiàn)性及準(zhǔn)確性。
第五步：確定需檢測(cè)的因子數(shù)量 如果待測(cè)因子超過(guò) 5 個(gè)，且樣本量較小時(shí)，單因子 ELISA 檢測(cè)方法并不是最佳選擇。 建議考慮多因子檢測(cè)方法，如固相芯片(樣本數(shù)量一般 5 個(gè)以?xún)?nèi)，檢測(cè)指標(biāo)可達(dá)上百個(gè))及 Luminex 液相芯片方法 (檢測(cè)樣本多達(dá) 80 個(gè)，檢測(cè)指標(biāo)多達(dá) 50 個(gè))或微流控 ELISA 檢測(cè)系統(tǒng) Ella。 可節(jié)約樣本及時(shí)間成本，也可保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。
第六步：預(yù)算評(píng)估 預(yù)算往往是大家優(yōu)先考慮的，實(shí)際上，不能夠一味講究產(chǎn)品價(jià)格，更需要考慮性?xún)r(jià)比。生物學(xué)是極其嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)，一致性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是基金、文章等評(píng)審過(guò)程中必不可少的因素，即使低廉的價(jià)格，不能夠完美重現(xiàn)結(jié)果，也是資源的另一種浪費(fèi)。 |
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