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品牌:原鑫生物
貨號:YX-SS-SJ2214
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小鼠神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白4(NRG-4)試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗小鼠NRG-4抗體包被于酶標(biāo)板上,實(shí)驗(yàn)時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的小鼠NRG-4會與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠NRG-4抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。抗小鼠NRG-4抗體與結(jié)合在包被抗體上的小鼠NRG-4結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值,NRG-4濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中NRG-4的濃度。


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由于高脂肪和高糖飲食伴隨著久坐不動的生活方式,糖尿病已成為全球流行病。文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)表明 Nrg4 對治療肥胖相關(guān)的代謝紊亂包括 2 型糖尿病 (T2D) 具有潛在的治療作用。在我們的研究中使用了脂肪組織來源的 MSCs (ADSCs),因?yàn)樗鼈兒茇S富,并且可以通過微創(chuàng)手術(shù)收獲。最后,我們的研究表明,ADSC 移植通過多種機(jī)制改善 HFD 喂養(yǎng)小鼠的葡萄糖耐量和代謝平衡,包括上調(diào) GLUT4 表達(dá)和抑制炎癥。更重要的是,我們的研究表明,鑒于 Nrg4 在減弱肝臟脂肪生成中的作用,Nrg4 過表達(dá)可以提高 ADSCs 在改善胰島素抵抗 (IR) 和其他肥胖相關(guān)代謝紊亂方面的功效。


本研究的目的是評估間充質(zhì)干細(xì)胞 (MSC) 中過度表達(dá)神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白 4 (Nrg4)(一種已知可減弱肝臟脂肪生成的生長因子)是否可以增強(qiáng)其改善胰島素抵抗 (IR) 和改善高血脂代謝的能力。脂肪飲食(HFD)喂養(yǎng)的小鼠。六周大的 C57BL/6 小鼠喂食 HFD 12 周,然后靜脈移植脂肪組織來源的 MSCs (ADSCs) 或過表達(dá) Nrg4 的 ADSCs (Nrg4-ADSCs)。在細(xì)胞注射后四和八周進(jìn)行體重和血糖和胰島素水平的評估以及葡萄糖耐量試驗(yàn)和胰島素耐量試驗(yàn)。還測量了血漿和肝臟中的甘油三酯 (TG) 和總膽固醇 (TC) 水平。葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 4 (GLUT4)、白介素-6 (IL-6)、通過實(shí)時聚合酶鏈反應(yīng) (RT-PCR) 分析評估肌肉和脂肪組織中的腫瘤壞死因子-α (TNF-α) 和腫瘤壞死因子-α (TNF-α)。


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分別通過 RT-PCR 和蛋白質(zhì)印跡在 mRNA 和蛋白質(zhì)水平評估與脂質(zhì)代謝相關(guān)的基因的表達(dá),包括甾醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c (SREBP-1c) 和脂肪酸合酶。接受 ADSC 或 Nrg4-ADSC 的 HFD 喂養(yǎng)小鼠顯示出血糖水平降低和胰島素敏感性增強(qiáng),而 Nrg4-ADSC 組在這些方面表現(xiàn)出更大的改善。ADSC 或 Nrg4-ADSC 輸注可部分逆轉(zhuǎn) HFD 誘導(dǎo)的骨骼肌和脂肪組織中 GLUT4、IL-6 和 TNF-α 表達(dá)的變化;然而,這兩組之間沒有觀察到差異。與 ADSC 組相比,Nrg4-ADSC 處理的小鼠顯示出較少的脂肪細(xì)胞沉積,血清和肝臟中的 TG 和 TC 水平降低,SREBP-1c 和脂肪酸合酶的表達(dá)降低。


ADSC 移植可降低血糖水平并改善 HFD 誘導(dǎo)的 IR。ADSC 的保護(hù)作用可歸因于骨骼肌和脂肪組織中炎癥的抑制和葡萄糖攝取的增加。更重要的是,ADSCs 中的 Nrg4 過表達(dá)可以通過減弱肝臟脂肪生成來增強(qiáng)這種功效。ADSC 的保護(hù)作用可歸因于骨骼肌和脂肪組織中炎癥的抑制和葡萄糖攝取的增加。更重要的是,ADSCs 中的 Nrg4 過表達(dá)可以通過減弱肝臟脂肪生成來增強(qiáng)這種功效。ADSC 的保護(hù)作用可歸因于骨骼肌和脂肪組織中炎癥的抑制和葡萄糖攝取的增加。更重要的是,ADSCs 中的 Nrg4 過表達(dá)可以通過減弱肝臟脂肪生成來增強(qiáng)這種功效。


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